常見問題
問:如何獲得擬南芥無菌苗?
答:擬南芥無菌苗獲取步驟如下:
1. 取保存的擬南芥種子適量,倒入1.5ml的離心管中,加入無菌水,震蕩數(shù)次,高速離心15s,將上清及漂浮的種子棄掉。
2. 向離心管中加入1ml的 70%乙醇,震蕩10s,用移液器小心地移除上清。
3. 向離心管中加入1ml的無菌去離子水ddH2O,震蕩后吸除,重復(fù)兩次。
4. 向離心管中加入1ml的3%次氯酸鈉溶液,在渦旋振蕩器上強(qiáng)力震蕩10min,用移液器小心地移除上清。
5. 向離心管中加入1ml的無菌去離子水ddH2O,震蕩后吸除,重復(fù)3次以上。
6. 向離心管中加入500μl的無菌去離子水ddH2O,震蕩后,將種子傾倒在含有無菌濾紙的培養(yǎng)皿中。
7. 待水稍干以后,用小鑷子取擬南芥種子點(diǎn)種到已經(jīng)晾干的MS培養(yǎng)基平板上。
8. 用封口膜封好培養(yǎng)皿,寫好標(biāo)簽。
9. 將封好的平板放到4℃的冰箱2-3d,進(jìn)行春化處理,打破種子休眠期。
10. 將春化處理后的平板放入組織培養(yǎng)室(22℃-23℃),培養(yǎng)3-4d,種子即萌發(fā)。
11. 在培養(yǎng)室培養(yǎng) 7-10d,幼苗長(zhǎng)出兩片真葉以后,即可移栽到土里獲得擬南芥植株。
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